M.S. Arenas de Larriva, I. Ortea, E. Chicano Gálvez, A. Rodríguez Ariza, J. Cosano Povedano, B. Jurado Gámez.
Introducción: la identificación de marcadores en el broncoaspirado puede representar un hallazgo relevante, complementario al estudio citohistológico.
Objetivo: determinar si el procedimiento aplicado es válido para obtener péptidos y proteínas suficientes, normalizar el protocolo y realizar un análisis shotgun por espectrometría de masas de los péptidos resultantes.
Material y Métodos: se incluyeron 4 muestras de broncoaspirado de pacientes con adenocarcinoma de pulmón, aplicando el siguiente flujo de trabajo (I) recolección del broncoaspirado; (II) purificación de su componente proteica; (III) digestión proteica en solución; y (IV) análisis shotgun por espectrometría de masas de los péptidos resultantes. Para clasificar las proteínas según componente celular, proceso biológico y función molecular, se realizó un análisis Gene Onthology.
Resultados: en la muestra de 2,1 ml de broncoaspirado medio por paciente, fijando una tasa de falso descubrimiento (FDR, False Discovery Rate) restrictiva del 1%, se identificaron un número elevado de proteínas, con una media de 625, rango entre 529 a 708, y 6.290 péptidos únicos, rango entre 5.585 a 6.759. La composición proteica de las muestras fue homogénea, sin diferencias en la clasificación en relación a los componentes celulares, procesos biológicos y funciones moleculares. La eficacia de la digestión enzimática fue mayor del 90% en todos los casos, lo que asegura la reproducibilidad de la metodología utilizada.
Conclusiones: la metodología desarrollada para el análisis proteómico es altamente eficaz y reproducible, identificando un número elevado de proteínas en el broncoaspirado y permitirá realizar, de manera robusta, un estudio cuantitativo en una muestra amplia de pacientes y grupo control.
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