REVISTA ESPAÑOLA
DE PATOLOGÍA
TORÁCICA
ISSN: 1889-7347

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IDENTIFICADO
Desarrollo y validación de un protocolo para el análisis proteómico de muestras de broncoaspirado de pacientes con adenocarcinoma de pulmón
Originales

M.S. Arenas de Larriva, I. Ortea, E. Chicano Gálvez, A. Rodríguez Ariza, J. Cosano Povedano, B. Jurado Gámez.

Resumen

Introducción: la identificación de marcadores en el broncoaspirado puede representar un hallazgo relevante, complementario al estudio citohistológico.

Objetivo: determinar si el procedimiento aplicado es válido para obtener péptidos y proteínas suficientes, normalizar el protocolo y realizar un análisis shotgun por espectrometría de masas de los péptidos resultantes.

Material y Métodos: se incluyeron 4 muestras de broncoaspirado de pacientes con adenocarcinoma de pulmón, aplicando el siguiente flujo de trabajo (I) recolección del broncoaspirado; (II) purificación de su componente proteica; (III) digestión proteica en solución; y (IV) análisis shotgun por espectrometría de masas de los péptidos resultantes. Para clasificar las proteínas según componente celular, proceso biológico y función molecular, se realizó un análisis Gene Onthology.

Resultados: en la muestra de 2,1 ml de broncoaspirado medio por paciente, fijando una tasa de falso descubrimiento (FDR, False Discovery Rate) restrictiva del 1%, se identificaron un número elevado de proteínas, con una media de 625, rango entre 529 a 708, y 6.290 péptidos únicos, rango entre 5.585 a 6.759. La composición proteica de las muestras fue homogénea, sin diferencias en la clasificación en relación a los componentes celulares, procesos biológicos y funciones moleculares. La eficacia de la digestión enzimática fue mayor del 90% en todos los casos, lo que asegura la reproducibilidad de la metodología utilizada.

Conclusiones: la metodología desarrollada para el análisis proteómico es altamente eficaz y reproducible, identificando un número elevado de proteínas en el broncoaspirado y permitirá realizar, de manera robusta, un estudio cuantitativo en una muestra amplia de pacientes y grupo control.

 


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